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MaxCyte電穿孔技術(shù):病毒載體生產(chǎn)的新革命

發(fā)布日期:2024-11-22      瀏覽次數(shù):448

01. 研究背景

(1) 研究問題:這篇文章主要探討了使用MaxCyte流式電穿孔技術(shù)進行病毒載體(包括腺相關(guān)病毒和慢病毒)生產(chǎn)的方法和效率。

(2) 研究難點:傳統(tǒng)的病毒載體生產(chǎn)技術(shù)勞動密集、步驟多且效率低,難以滿足大規(guī)模生產(chǎn)的需求。

(3) 相關(guān)工作:MaxCyte的流式電穿孔技術(shù)作為一種通用的瞬時轉(zhuǎn)染平臺,旨在解決病毒載體生產(chǎn)的諸多問題。



02. 研究方法

提出了使用MaxCyte流式電穿孔技術(shù)進行病毒載體生產(chǎn)的方法。具體來說包括:

(1) 細胞類型:該技術(shù)適用于貼壁細胞和懸浮細胞。

(2) 多質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染:MaxCyte系統(tǒng)可以同時轉(zhuǎn)染多個質(zhì)粒,包括大質(zhì)粒,從而制造復(fù)雜的病毒載體。

(3) 可擴展性:MaxCyte系統(tǒng)在不同規(guī)模的細胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出一致的高轉(zhuǎn)染效率和細胞活力。



03. 實驗設(shè)計

(1) 大規(guī)模慢病毒生產(chǎn):在貼壁HEK細胞中使用MaxCyte STX進行四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。

•  HEK 293FT細胞在轉(zhuǎn)染前2-3天在10層細胞工廠中接種。

•  使用流式電穿孔技術(shù)進行共轉(zhuǎn)染,每天收集培養(yǎng)基并測量轉(zhuǎn)導(dǎo)單位。


(2) 懸浮細胞中的慢病毒生產(chǎn):懸浮適應(yīng)的HEK 293FT細胞在10L Wave Cellbags中培養(yǎng),通過流式電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)染慢病毒組件質(zhì)粒。

•  轉(zhuǎn)染后的細胞被返回Cellbags中。

•  在GMP合規(guī)的核心設(shè)施中進行3次生產(chǎn)運行,每次運行均顯示出高滴度。


(3) 不同規(guī)模下的慢病毒生產(chǎn)一致性通過靜態(tài)電穿孔和流式電穿孔(使用MaxCyte)。

•  測量轉(zhuǎn)染后48小時的慢病毒滴度,結(jié)果顯示無論規(guī)模大小,生產(chǎn)力一致。


(4) 高效的高滴度AAV生產(chǎn):在貼壁HEK細胞中使用MaxCyte STX進行三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。

•  轉(zhuǎn)染后48小時,幾乎100%的轉(zhuǎn)染細胞表現(xiàn)出強勁的轉(zhuǎn)基因表達。

•  通過qPCR分析測量細胞沉淀中的高滴度AAV。



04. 結(jié)果與分析

(1) 大規(guī)模慢病毒生產(chǎn):在貼壁HEK細胞中,使用MaxCyte STX進行四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,每天收集培養(yǎng)基并測量轉(zhuǎn)導(dǎo)單位,結(jié)果顯示高效的生產(chǎn)能力。

(2) 懸浮細胞中的慢病毒生產(chǎn):在懸浮適應(yīng)的HEK 293FT細胞中,使用MaxCyte系統(tǒng)進行生產(chǎn),3次生產(chǎn)運行均顯示出高滴度,表明該技術(shù)在懸浮細胞中的可擴展性和一致性。

(3) 不同規(guī)模下的慢病毒生產(chǎn)一致性:通過靜態(tài)和流式電穿孔在HEK細胞中生產(chǎn)慢病毒,結(jié)果顯示無論規(guī)模大小,生產(chǎn)力一致。

(4) 高效的高滴度AAV生產(chǎn):在貼壁HEK細胞中,使用MaxCyte STX進行三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,結(jié)果顯示幾乎100%的轉(zhuǎn)染細胞表現(xiàn)出強勁的轉(zhuǎn)基因表達,并且通過qPCR分析測量到高滴度的AAV。




總體結(jié)論

MaxCyte的可擴展電穿孔技術(shù)允許對貼壁和懸浮適應(yīng)細胞進行高效轉(zhuǎn)染。該技術(shù)能夠共轉(zhuǎn)染多個質(zhì)粒和大質(zhì)粒,制造復(fù)雜的病毒載體。MaxCyte轉(zhuǎn)染過程的一致性使得無論培養(yǎng)規(guī)模如何,生產(chǎn)產(chǎn)量都具有一致性。高效的懸浮細胞轉(zhuǎn)染簡化了使用MaxCyte過程進行病毒載體制造的可擴展性。通過MaxCyte電穿孔技術(shù)生成的高滴度AAV展示了該技術(shù)在制造應(yīng)用中的多樣性。



* 本文轉(zhuǎn)載自「拓普百奧」微信公眾號,作者:宇文數(shù)學(xué)(已獲得作者授權(quán))




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